樣品的采集是微生物檢驗的重要組成局部，用于檢驗的樣品數量和狀況具有重要意義。這對取樣人員和制樣人員提出了很高的專業要求，既要保證樣品的代表性和分歧性，又要保證整個微生物檢驗進程在無菌操作的條件下停止。小編整理了局部微生物檢測進程中取樣、樣液制備、稀釋、接種、培育的復雜操作，大家一同窗習參考。

一、微生物取樣及樣液制備

1 樣品標識

取樣時，將樣品按不同的污染水平從低污染水平到高污染水平順序陳列，

并對出對應的標識，其中按細菌數平皿、大腸菌群平皿、金黃色葡萄球菌平皿的順序，2-3個樣品一摞。如圖

2 樣品采取

（1）固體樣品

① 開啟部位及其周圍用酒精棉停止消毒，再用火焰滅菌的剪刀剪開，如圖

② 在電子稱上放入無菌均質袋（手不要碰及袋口）去皮調整至零，如圖4

③ 用火焰滅菌后的剪刀和鑷子取樣，稱取25g樣品，如圖

④ 參與225ml滅菌磷酸鹽緩沖液（開蓋瓶塞時瓶口部和瓶塞應在火焰經過1-2次，以殺滅從空氣中落入雜菌）后，均質或待均質，如圖

⑤ 擦拭潔凈剪刀鑷子后浸泡于75%酒精容器中并將樣品封口；將袋子折疊后用拍擊式均質器均質約30秒作為樣液，此時均質袋內要設定為不含空氣（可依據樣品不同狀況相應調整均質時間），如圖

（2）液體樣品

①冷凍樣品完全解凍后運用。

②75%酒精棉消毒開啟部位及其周圍，再用火焰滅菌的剪刀開啟，用滅菌吸管取充沛混合后樣25ml。

③ 同上 ④ ⑤。

(3) 粉末狀樣品以及半固體樣品

①將樣品混合均一化。

②75%酒精棉消毒開啟部位及其周圍，再用火焰滅菌的剪刀開啟，以無菌匙采取混合后樣10g。

③參與90ml滅菌磷酸鹽緩沖液，開蓋瓶塞時瓶口部和瓶塞應在火焰經過1-2次，以殺滅從空氣中落入雜菌。

④ 同上⑤。

留意

1

從罐頭取樣時，在外表放上小塊酒精棉（倒上大批酒精）點火熄滅后開罐。罐頭起子用酒精棉擦拭火焰滅菌后運用。

2

75%酒精必需保證一周換3次，假設容器內有清楚的污物應立刻改換；火焰滅菌的剪刀、鑷子經過火焰4-5s即可

二、樣液稀釋方法

①從均質袋準確吸取樣液1ml，如圖

②沿管壁冉冉接種到含9ml磷酸鹽緩沖液里，蓋上試管塞后充沛震蕩混勻為1：100稀釋液。（勿使吸管*伸入稀釋液內，以免吸管外部粘附的檢液溶于其內。）

③重復該操作，按需求配制1：1000、1：10000…稀釋液。

④為增加樣品稀釋誤差，在延續遞增稀釋時（原液在前稀釋液在后），每一稀釋液應充沛振搖，使其平均，同時每一稀釋度應改換一支吸管。

⑤不要在稀釋劑中吹洗吸管。

留意

1

樣液稀釋必需加以足夠震搖，確保液體混勻，構成的菌落能以10倍遞增或遞減，契合邏輯性

2

車間產品依據加工工藝或對污染狀況的估量選擇適宜的稀釋倍。（尤其留意蔥、姜、蒜等無加熱類產品、保管實驗、外調新廠家、樣品開發、原料等樣品）。

三、樣液接種方法：

① 從吸管筒沿筒上壁抽出吸管，在火焰旁吹洗吸耳球同時在吸管尾端插上吸耳球后，從吸管尾端至*快速經過火焰，并且排空吸管里殘留的水，如圖

② 吸管拔出均質袋樣液內的深度不超越2.5cm處，準確吸取樣品勻液，吸管尖不要碰著袋口。吸入的液體應先高于所要求的刻度, 然后提起吸管使其*分開液面并貼在袋內將液體調至所要求的刻度。

1ml、1ml、1m、0.2ml無菌操作區分以2～4s內完全注入已標識清楚的細菌數、大腸菌群、EC以及金黃色葡萄球菌平皿中，接種后迅速震蕩平均，如圖

③ 假設在接種前，某一樣品液體放置超越3 min，應重新均質；為了驗證稀釋液、培育基、平皿、吸管等用具無菌需做空白對照。

四、傾注倒藥方法

右手持培育基三角瓶（已放50-60℃的水浴中恒溫）置火焰旁邊，用左手拇指和食指或中指使平皿開啟成一縫，迅速倒人培育基約15ml，加蓋后悄然搖動培育皿，使培育基平均散布在培育皿底部，然后平置于桌面上；也可將平皿放在火焰左近的桌面上用左手的拇指和食指翻開培育皿，再注入培育基，搖勻，如圖

留意

1

培育基在50-60℃水浴中的保溫時間不要超越4h；從采樣末尾到分注培育基操作限于20min以內。

2

涂布的平皿外表需枯燥（枯燥不充沛易發作菌落分散，有冷凝水不利于細菌分別并且會招致細菌繁衍使結果失真；枯燥過火，會招致培育基裂開，不能用；枯燥適宜，則樣液吸收完全、快）。

3

玻璃器皿的外表容易被細菌吸附，所以菌液注入平皿后應盡快將平皿內的樣液和瓊脂培育基充沛混合，否則細菌不容易分散。混合方法是將平皿傾斜和旋轉使之充沛混合，但要留意不要讓培育基從培育皿內溢出，且不要粘附在平皿壁和蓋上。

五、平皿培育

（1） 將平皿倒置放入恒溫培育箱中，平皿間要留有空隙停止空氣流通，使培育物的溫度盡快與培育箱溫度到達分歧，依照規則的溫度和時間停止培育并堅持一定的濕度，經48h培育的瓊脂培育基的失重不得超越15％，如圖

（2）斜面、高層斜面、液體培育基立在試管架上放入恒溫培育箱中，按所規則的時間溫度停止培育，如圖

課題范圍：微生物學，化學，生命迷信，食品迷信與工程