化妝品微生物檢驗流程
按照《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015版第五章 微生物檢驗方法對化妝品微生物進(jìn)行檢驗工作。
微生物檢驗方法總則
1 范圍
本部分規(guī)定了化妝品微生物學(xué)檢驗的基本要求。
本部分適用于化妝品樣品的采集、保存及供檢樣品制備。
2 儀器和設(shè)備
2.1 天平：0~200g，精確至 0.1g。
2.2 高壓滅菌器。
2.3 振蕩器。
2.4 三角瓶：250mL、150mL。
2.5 玻璃珠。
2.6 玻璃棒。
2.7 滅菌刻度吸管：10mL、1mL。
2.8 恒溫水浴箱。
2.9 均質(zhì)器或研缽。
2.10 滅菌均質(zhì)袋。
3 培養(yǎng)基和試劑
3.1 生理鹽水
成分：氯化鈉 8.5g
蒸餾水加至 1000mL
制法：溶解后，分裝到加玻璃珠的三角瓶內(nèi)，每瓶 90mL，121℃高壓滅菌 20min。
3.2 SCDLP 液體培養(yǎng)基
成分：酪蛋白胨 17g
大豆蛋白胨 3g
氯化鈉 5g
磷酸氫二鉀 2.5g
葡萄糖 2.5g
卵磷脂 1g
吐溫 80 7g
蒸餾水 1000mL
制法：先將卵磷脂在少量蒸餾水中加熱溶解后，再與其他成分混合，加熱溶解，調(diào) pH
為 7.2~7.3 分裝，每瓶 90mL，121℃高壓滅菌 20min。注意振蕩，使沉淀于底層的吐溫 80 充
分混合，冷卻至 25℃左右使用。
注：如無酪蛋白胨和大豆蛋白胨，也可用多胨代替。
3.3 滅菌液體石蠟。
制法：取液體石蠟 50mL，121℃高壓滅菌 20min。
3.4 滅菌吐溫 80。
制法：取吐溫 80 50mL，121℃高壓滅菌 20min。
4 樣品的采集及注意事項
4.1 所采集的樣品，應(yīng)具有代表性，一般視每批化妝品規(guī)格大小，隨機抽取相應(yīng)數(shù)量的包裝
單位。檢驗時，應(yīng)從不少于2個包裝單位的樣品中共取 10g 或 10mL。包裝量小于 20g 的樣
品，采樣時可適當(dāng)增加樣品包裝數(shù)量。
4.2 供檢樣品，應(yīng)嚴(yán)格保持原有的包裝狀態(tài)。容器不應(yīng)有破裂，在檢驗前不得打開，防止樣
品被污染。
4.3 接到樣品后，應(yīng)立即登記，編寫檢驗序號，并按檢驗要求盡快檢驗。如不能及時檢驗，
樣品應(yīng)置于室溫陰涼干燥處，不要冷藏或冷凍。
4.4 若只有一個樣品而同時需做多種分析，如微生物、毒理、化學(xué)等，則宜先取出部分樣品
做微生物檢驗，再將剩余樣品做其他分析。
4.5 在檢驗過程中，從打開包裝到全部檢驗操作結(jié)束，均須防止微生物的再污染和擴散，所
用器皿及材料均應(yīng)事先滅菌，全部操作應(yīng)在符合生物安全要求的實驗室中進(jìn)行。
5 供檢樣品的制備
5.1 液體樣品
5.1.1 水溶性的液體樣品：用滅菌吸管吸取 10mL 樣品加到 90mL 滅菌生理鹽水中，混勻
后，制成 1:10 檢液。
5.1.2 油性液體樣品：取樣品 10g，先加 5mL 滅菌液體石蠟混勻，再加 10mL 滅菌的吐溫
80，在 40℃~44℃水浴中振蕩混合 10min，加入滅菌的生理鹽水 75mL（在 40℃~44℃水浴中
預(yù)溫），在 40℃~44℃水浴中乳化，制成 1:10 的懸液。
5.2 膏、霜、乳劑半固體狀樣品
5.2.1 親水性的樣品：稱取 10g，加到裝有玻璃珠及 90mL 滅菌生理鹽水的三角瓶中，充分
振蕩混勻，靜置 15min。用其上清液作為 1:10 的檢液。
5.2.2 疏水性樣品：稱取 10g，置于滅菌的研缽中，加 10mL 滅菌液體石蠟，研磨成粘稠狀，
再加入 10mL 滅菌吐溫 80，研磨待溶解后，加 70mL 滅菌生理鹽水，在 40℃~44℃水浴中充
分混合，制成 1:10 檢液。
5.3 固體樣品
稱取 10g，加到 90mL 滅菌生理鹽水中，充分振蕩混勻，使其分散混懸，靜置后，取上
清液作為 1:10 的檢液。
使用均質(zhì)器時，則采用滅菌均質(zhì)袋，將上述水溶性膏、霜、粉劑等，稱 10g 樣品加入
90mL 滅菌生理鹽水，均質(zhì) 1min~2min；疏水性膏、霜及眉筆、口紅等，稱 10g 樣品，加 10mL
滅菌液體石蠟，10mL 吐溫 80，70mL 滅菌生理鹽水，均質(zhì) 3min~5min。

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化妝品微生物檢驗標(biāo)準(zhǔn)
《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》2007版中規(guī)定，眼部化妝品、口唇等黏膜用化妝品以及嬰兒和兒童用化妝品中，菌落總數(shù)要<500cfu/ml(g)其他化妝品菌落總數(shù)要<1000 cfu/ml(g);霉菌和酵母菌總數(shù)要<100cfu/ml(g)。像糞大腸菌群、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌等致病菌在1 g或1mL化妝品中是不得檢出的。
《化妝品生產(chǎn)企業(yè)衛(wèi)生規(guī)范》中規(guī)定：生產(chǎn)過程中半成品儲存間、灌裝間、清潔容器儲存間和更衣室空氣中細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤1000 cfu/立方米;灌裝間工作臺表面細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤20 cfu/平方米，工人手表面細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤300 cfu/只手，并不得檢出致病菌。

化妝品微生物檢驗項目
1、菌落總數(shù)：化妝品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后(如培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間、pH值、需氧性質(zhì)等)，1g (1mL）檢樣中所含菌落的總數(shù)。所得結(jié)果只包括一群本方法規(guī)定的條件下生長的嗜中性的需氧性和兼性厭氧菌落總數(shù)。
2、霉菌和酵母菌總數(shù)：化妝品檢樣在一定條件下培養(yǎng)后，1g或1mL化妝品中所污染的活的霉菌和酵母菌數(shù)量，以判明化妝品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般衛(wèi)生狀況。
3、耐熱大腸菌群：—群需氧及兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌,在44.5℃培養(yǎng)24h—48h能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣。
4、金黃色葡萄球菌：革蘭氏陽性球菌，呈葡萄狀排列，無芽胞,無莢膜，能分解甘露醇，血漿凝固酶陽性。
5、銅綠假單胞菌：屬于假單胞菌屬，為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶陽性，能產(chǎn)生綠膿菌素。此外還能液化明膠,還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在42℃±1℃條件下能生長。

從配料、生產(chǎn)、罐裝、分裝等環(huán)節(jié)，微生物管控成為了化妝品生產(chǎn)的基本盤，是化妝品是否合格的重要標(biāo)準(zhǔn)。一旦微生物“超限”，化妝品將直接危及消費者的健康和安全。健明迪檢測是專業(yè)的化妝品檢測備案服務(wù)機構(gòu)，具備開展化妝品備案檢測，化妝品安全評估、化妝品功效評價等資質(zhì)。本文總結(jié)了健明迪檢測化妝品檢測中心的化妝品微生物檢驗項目及檢驗流程，供參考。